转化生长因子-β（transforming growth factor-β, TGF-β）是一种重要的多功能细胞因子，调节细胞分化、胚胎发生、组织修复和免疫稳态等（Morikawa et al., 2
1 靶点和信号背景
转化生长因子-β（transforming growth factor-β, TGF-β）是一种重要的多功能细胞因子，调节细胞分化、胚胎发生、组织修复和免疫稳态等（Morikawa et al., 2016）。TGF-β信号转导失调与癌症、纤维化、免疫紊乱和心血管疾病等病理状态相关（Derynck et al., 2021）。TGF-β在早期作为肿瘤抑制因子，在晚期作为肿瘤启动子。TGF-β的功能不仅限于调控癌细胞的增殖、分化、凋亡、上皮-间充质转化和转移（Liu et al., 2021）。近年来，TGF-β作为肿瘤免疫检查点治疗的主要风险因素受到极大关注：肿瘤微环境中的TGF-β抑制抗肿瘤免疫应答、促进肿瘤免疫逃逸、导致抗PD-1/L1治疗失败（Mariathasan et al., 2018）。因此，TGF-β是上述疾病重要的诊断生物标志物和预后指标以及治疗开发的关键靶点（Derynck et al., 2021）。
TGF-β的促癌作用引起了广泛的关注，其干预为癌症患者提供了一种治疗途径。研究TGF-β信号通路的机制、开发靶向TGF-β的治疗药物以及疾病的临床诊断至关重要。TGF-β诱导的经典SMAD和非经典信号通路的示意图如图1所示（Liu et al., 2021）。
各种药物干预分为靶向不同的TGF-β信号成分，即TGF-β mRNA、参与激活潜在TGF-β的GARP/整合素以及与TGF-β受体和TβRI激酶活性相互作用的配体。在临床前模型中研究的有前途的新靶向分子以红色突出显示（图2）（Liu et al., 2021）。针对TGF-β信号转导的不同策略，包括反义寡核苷酸（AON）、中和抗体、环RGD五肽、TGF-β配体陷阱（trap）和小分子激酶抑制剂（SKI）（图2）（Liu et al., 2021）
2 CAGA12报告基因细胞
CAGA12是TGF-β信号通路的下游响应元件（图1）。报告基因质粒pCAGA12-TA-Luc以pGL6-TA质粒为模板，在其多克隆位点插入了一个CAGA12结合位点，可以高灵敏度地检测CAGA12的激活水平。pCAGA12-TA-Luc质粒图谱如图3所示。
本检测是利用稳定转染pCAGA12-TA-Luc质粒的HEK293A或者A549细胞系，评价药物对TGF-β依赖的CAGA12转录激活的抑制作用。加入TGF-β1能够诱导CAGA12的转录激活作用，HEK293A 或者 A549/CAGA12-Luc细胞萤火虫萤光素酶的活性就会提高，加入TGF-β I 型受体 ALK5、ALK4 和 ALK7 的抑制剂A83-01能抑制TGF-β诱导的CAGA12转录激活作用。
参考文献
1.Derynck R, Turley SJ, Akhurst RJ. TGFβ biology in cancer progression and immunotherapy. Nat. Rev. Clin. Oncol., 2021, 18(1): 9-34.
2.Liu S, Ren J, Ten Dijke P. Targeting TGFβ signal transduction for cancer therapy. Signal Transduct Target Ther, 2021, 6(1): 8.
3.Mariathasan S, Turley SJ, Nickles D, et al. TGFβ attenuates tumour response to PD-L1 blockade by contributing to exclusion of T cells. Nature, 2018, 554(7693): 544-548.
4.Morikawa M, Derynck R, Miyazono K. TGF-β and the TGF-β family: context-dependent roles in cell and tissue physiology. Cold Spring Harb Perspect Biol, 2016, 8(5): a021873.
